Investigation du rôle de pikfyve dans la progression tumorale des carcinomes rénaux

Abstract

Le but de ce projet est d'étudier l'implication de PIKfyve dans la progression tumoraledes carcinomes rénaux. Plus précisément, les objectifs spécifiques sont : I) d'évaluer le rôle de PIKfyve au niveau des composantes liées à l'invasion des ccRCCs, II) déterminer le potentiel des inhibiteurs de PIKfyve dans le processus angiogénique, et III) d'étudier l'effet de l'inhibition de PIKfyve sur la croissance tumorale in vivo. Pour réaliser ce projet, l'expression des protéines du complexe PIKfyve a été réprimée dans les cellules 786-0 à l'aide d'un système lentiviral inductible shRNA. Un test multiplex luminex a été réalisé afin d'analyser la concentration des facteurs de croissance, de cytokines et des métalloprotéinases matricielles (MMPs) présentent dans le milieu conditionné récolté des cellules exprimant le shRNA. De plus, les cellules 786-0 et RCC4 ont été traitées avec le STF-62247 et l'apilimod, un autre inhibiteur de PIKfyve. Un test de formation de tubes a été réalisé pour étudier l'angiogenèse. Les niveaux d'expression d'ARNm et de protéines ont été évalués à l'aide d'analyses RT-qPCR et d'immunobuvardages de type western, respectivement. Finalement, des cellules exprimant le shRNA ont été injectées dans un modèle de souris immunodéficientes pour étudier la croissance tumorale lors d'une inhibition de PIKfyve ou de Vac14. --Résumé.